大概剪成1mm^3左右
2019-10-26 15:19
来源:未知
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瘤子长不出无非两方面原因,老鼠或者细胞。关于裸鼠,楼上已有描述,接种部位和接种年龄。一般来说,左侧前肢靠近心脏,血供会比较丰富,容易生长新血管。虽然文献都报道在腋窝注射,但如果局部皮下组织致密,会相对容易形成浓聚的小包块,容易达到有效的细胞浓度。裸鼠周龄不要小于四周,否则动物可能不能耐受,过早死亡,也不可大于六周,否则免疫力会增强,不容易形成肿瘤。如果以上都不能成瘤,实验室之前又没有固定protocol,动物可以尝试nod/scid。细胞数量每个细胞株不同而有不同剂量,恶性程度高,有些胶质瘤,4次方就已经足够了,有些难长的,恐怕7次方都嫌不够。但一般达到2×10的7次方就不能再往上加,因为细胞悬液已经达到饱和状态,再往上增加细胞可能在注射时针管会对细胞有物理损伤。细胞悬液大概是一个注射点150微升左右。另外,还可以添加matrigel,理论上可以促进成瘤。

接种的方法:第一次接种了四只裸鼠,大概十天左右已经差不多长到5mm左右,但是肿瘤大小差异比较大,这样会对试验分组造成很大的影响,于是我就把这四只老鼠的移植瘤取出来置于pbs中,剪碎,大概剪成1mm^3左右,然后移植到其他老鼠的皮下。大概四天就可以成瘤了。

pbs调节细胞浓度至0.5*10^7,每只打0.2ml于裸鼠右肩胛部皮下。细胞在运送的过程中我是找了一个保温盒,里面放了两个冰袋,然后把细胞分装在试管里放进去。注意细胞不能直接贴着冰袋,最好用试管架,让试管和冰袋之间有一定的距离。

我做的是结肠癌模型,hct116细胞。实验室离动物房也要二十分钟的车程。裸鼠接种模型做的还是比较成功的。一下是我的造作方法,仅供参考。

个人觉得这样做的好处是成瘤快,培养细胞少,成瘤大小相对比较均匀,而且成瘤率比较高,我的是100%成瘤了。

祝楼主实验顺利!

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